اريج عطية حسين* وفاء حسن محمد و شاهناز عبد القادر عمي*

Transcript

1 C 4 C 3 مجمة جامعة النهرين المجمد 16 العدد) 1 ( آذار 2013 ص 1-5 قياس مستوى االجسام المضادة نوع IgA IgM IgG وبروتينات المتمم الخمجين بطفيمي Giardia lamblia في االطفال الخالصة ىدفت االطفال الخمجين اريج عطية حسين* وفاء حسن محمد** و شاهناز عبد القادر عمي*** * فرع االحياء المجهرية كمية الطب جامعة ديالى. ** قسم عموم الحياة كميه جامعة بغداد. *** فرع االحياء المجهرية كمية الطب جامعة السميمانية. الد ارسة الحالية الى قياس مستوى االجسام المضادة نوع, C 4 وعوامل المتمم,C 3,IgM, IgA, IgG في بطفيمي.G lamblia في محافظة بغداد, إذ اجري مسح ميداني لمتحري عن الطفيمي في الم ارجعين الوافدين الى مختب ارت مستشفى الكاظمية التعميمي في الكرخ ومستشفى القادسية العام في الرصافة ولممدة من )4002/2/42( ولغاية )4002/9/42( تم خالليا فحص و تشخيص اثنان وثالثون عينو ب ارز بطريقة الفحص المباشر وباستخدام محمول الممح الوظيفي وصبغة الموكل ايودين, جمعت 24 عينة دم وبفئة عمرية 24-6 سنة, فيما تم جمع 40 عينة دم اخرى لالطفال االصحاء من الفئة العمرية نفسيا لمخمجين, وذلك لغرض المقارنة والتعرف عمى التغي ارت الحاصمة بالمكونات المصمية. اوضحت نتائج الد ارسة ارتفاع في معدالت المضادة نوع السيطرة. IgG و IgA لوحظ حدوث ارتفاع غير معنوي في معدل المضادة نوع IgM بشكل معنوي في مصول دم االطفال عند مقارنتيا بمجموعة في مصول دم االطفال والخمجين عند مقارنتيا بمجموعة السيطرة. اظيرت النتائج حدوث زيادة معنوية في معدل تركيز المكونيين الثالث وال اربع لممتمم ( 3 C( 4 C, عما مسجل في مجموعة السيطرة. الكممات المفتاحية:, Giardia lamblia بروتينات المتمم, C 3, C 4 االجسام المضادة.IgG, IgM, IgA المقدمة يعد االسيال احد االسباب الرئيسية والمميتة في االطفال في الدول النامية [2]. وان أىم الممرضات المعوية الشائعة التي تسبب االسيال الحاد ىي البكتريا والفايروسات والطفيميات وىذه الممرضات قد تصيب المضيف بشكل منفرد أو مع بعضيا في ان واحد [4]. وتحظى االصابو بالطفيميات باىتمام العاممين في مجال الصحة العامة, ويرجع ذلك الى انتشار الطفيميات بنسب عالية وتوطنيا في اغمب انحاء العالم والى تأثي ارتيا المحتممة في الناحيتين الغذائية والمناعية لمسكان وبخاصة الذين يعيشون في المناطق االستوائية وشبو االستوائية[ 2 ]. ذكر[ 2 ] أن Giardia lamblia و Entamoeba histolytca ىما الطفيميان االكثر انتشا ار في العالم, ويسيمان في خمج عدد كبير من االشخاص, لعدم السيطرة عمييا بشكل فعال وتعد الكثافة السكانية من العوامل الميمة التي تساىم في تضاعف احتماالت الخمج بالطفيميات والحظ [5] ان G.lamblia تصيب بشكل اساسي المبائن كاالنسان والقطط والكالب والق ندس واالبقار[ 6 ]. وتمتمك طورين, طور الناشطة والطور المتكيس[ 7 ]. تحدث االصابو عن طريق تناول االكياس مع الطعام والش ارب المموث أو بصورة غيرمباشرة عن طريق االيدي المموثة بالغائط [8]. يتحر ارلطفيمي من الكيس بفعل حامضية المعدة واالنزيمات المعدية, وينجم عن ذلك تكوين طور الناشطة[ 9 ] وبعد مدة قصيرة تغادر الناشطة معدة المضيف استجابة النخفاض االس الييدروجيني[ 20 ]. وتمتصق بسطوح الخاليا الطالئية لالمعاء عن طريق استعماليا لقرص االلتصاق البطني, ثم تبدأ بالتكاثر بوساطة االنشطار الثنائي[ 22 ]. اذ يبدأ اوال انقسام النواتين يمييا انقسام في االجيزة الحركية ثم ممصات االلتصاق واخي ار السايتوبالزم بعدىا تتكيس الناشطة في الجزء البعيد من تجويف االمعاء الدقيقة [24]. تتباين 1

2 اريج عطية حسين العوامل المساىمة في اظيار العالمات السريرية اعتمادا عمى ض اروة سالالت الطفيمي[ 22 ] وعدد االكياس الممتيمة وعمر المضيف وحالة الجياز المناعي عند الخمج ط ارئق عدة لتشخيص الخمج االع ارض والعالمات السريرية, في مسحات الغائط الرطبة, ب من خالل استخدام طريقة التركيز الجيارديات الى تحفيز نوعين من الخمطية والخموية ىناك [20]. G.lamblia منيا, مالحظة وجود طور الناشطة المتحرك وجود الطور المتكيس في الغائط.[22] وتحرر [20]. يؤدي الخمج بداء االستجابة المناعية, %70 من G.lamblia مستضداتيا الموجودة عمى الخاليا السطحية كل ساعة 42 [25], وىذه المستضدات تعمل عمى تحفيز الخاليا التائية,T-cell لحدوث استجابة مناعية او تحاط من قبل االجسام المضادة التي تم اف ارزىا[ 26 ]. الكموبيولينات المناعية Immunoglobulins (Igs) وىي نواتج الخاليا البائية الناضجة التي تنتج استجابة لمتحفيز بالمستضدات. ان جزيئات االضداد ىي كموبيولينات مناعية ذات خصوصية معروفة تنتج من خاليا البالزما [27]. وتوجد خمسة اصناف من الكموبيولينات المناعية اعتمادا عمى الخصوصية المستضدية لمسمسمة الثقيمة في الجزيئة.)28) اكد [29] عمى ان االجسام المضادة نوع IgA IgM تمعبان دو ار رئيسا في ابادة الطفيميات. المكون الثالث لممتمم C 3 ىو احد مكونات و نظام المتمم وىو بروتين سكري )Glycoprotein( يوجد بتركيز 2.4 غ ارم/ لتر في بالزما الدم ويتكون من سمسمتين ىما الفا chain( ( وبيتا) chain ( ذات او ازن جزيئية ,240 كيمو دالتون عمى التوالي يصنع في [42] الكبد والخاليا البمعمية والخاليا الممفاوية والجمد, ويتصاحب مع نقص ىذا البروتين حصول اخماج جرثومية متكررة.[27] المكون ال اربع لممتمم,,C 4 يتكون عادة من ثالث γ سالسل ىي. الفا chain( ( وبيتا chain( ( وكاما ( )chain وتعد السمسة الفا من اكبر السالسل المكونة وتكمن اىميتو باعتباره جزء من المسمك التقميدي [45]. يصاحب النقص في ىذا المكون من المتمم عددا من االضط اربات المناعية الذاتية[ 46 ], ينشطر عند ارتباطو مع C 4 مؤديا C 1 الى تكوين قطعتين صغيرة (a C( 4 تتحرر. اما القطعة الكبيرة (b C( 4 فانيا ترتبط مع اليدف من اجل استم ارر التفاعل التتابعي,)Cascade( ويتم ىذا االرتباط بمساعدة ايون المغنسيوم + Mg.[45] المواد وط ارئق العمل شممت الد ارسة 24 طفل مخمجا بطفيمي.G lamblia من كال الجنسين ذكور )28( واناث )22( وبفئة عمرية ت اروحت بين 24-6 سنة, وقد تم التأكد من خمجيم من خالل الفحص المجيري لمب ارز الذي اثبت وجود الطفيمي فضال عن بعض االع ارض المرضية الم ارفقة لمخمج. وتم اختيارمجموعة السيطرة المكونة من 40 عينة دم الطفال من الفئة العمرية نفسيا لمجموعة المرضى, وقد تم التأكد من سالمتيم من خالل اج ارء فحص الب ارز العام ليم. تم سحب 5 ممميتر من دم المرضى الذين ثبت خمجيم بالطفيمي ومجاميع السيطرة االصحاء بوساطة محقنة نبيذة, معقمة, وتم وضع الدم المسحوب في انبوب بالستيكي معقم سعة 20 ممميتر, وال يحوي عمى المادة المانعة لمتخثر لغرض فصل المصل حيث تركت بدرجة ح اررة المختبر لمدة 20 دقيقة, بعدىا نبذت العينات باستخدام جياز طرد مركزي بسرعة 4500 دورة/ دقيقة لمدة 20 دقائق, تم سحب مصل الدم باستخدام ماصة باستور معقمة ووضع في ابندروف لقياس مستوى االجسام المضادة والمتمم. استخدمت طريقة االنتشار المناعي Radial Immuno )Mancini method( او ما تسمى Diffusion (RID) مبدأ العمل كان يعتمد عمى اظيار عالقة كمية بين المستضد الموجود في االكاروز واالجسام المضادة الموجودة في المصل وتم اج ارء االختبار حسب تعميمات الشركو المصنعو اذ جيزت اطباق معايرة لكل من C, 3,IgA,IgM,IgG C, 4 من شركة Biomaghreb بعدىا فتحت االطباق, وتركت بدرجة ح اررة المختبر لمدة 5 دقائق, ثم اضيف 5 مايكروليتر من مصل المرضى واالصحاء قيد الد ارسة في حفر كل من االطباق الحاوية عمى اضداد,IgM,IgG C, 4 C, 3,IgA في اليالم باستخدام ماصة دقيقة. ثم تركت االطباق لمدة 25 دقيقة في درجة ح اررة المختبر من دون تحريك. بعدىا وضعت االطباق في الثالجة بدرجة 2 م لمدة 28 ساعة لالطباق المستخدمة لقياس كل من,IgA,IgG C, 4 C, 3 ولمدة 74 ساعة لالطباق المستخدمة لقياس 2

3 مجمة جامعة النهرين المجمد 16 العدد) 1 ( آذار 2013 ص IgM تم قياس قطر حمقات الترسيب المتكونة حول الحفر نتيجة تفاعل المستضد النوعي )الذي ىو مصل المرضى واالصحاء( مع المصل المضاد الخاص بو الموجود في اليالم باستخدام منظار خاص لقياس التحاليل المناعية يدعى.(Immunoviewer) اخي ار استخرجت قيمة التركيز وذلك بمقارنة قطر حمقة الترسيب مع القيم المثبتة بالجدول المرفق مع االطباق المجيزة من قبل الشركة المصنعة. وتكون ق ارءة التركيز ب ممغ ارم/ديسميتر. النتائج تبين من نتائج قياس المضادة نوع,IgG IgA حدوث ارتفاع كبير في معدالتيا في مجموعة االطفال الخمجين إذ بم مستوى )92.5±988.2( IgG وIgA )72.5±282.2( مقارنة بمعدالتيا في مجموعة السيطرة )446.4±620.7(, )25.5±207.0( عمى التوالي. كما وجدت فروق معنوية بمقدار (0.05>P) بين مجموعة الخمجين ومجموعة السيطرة. اوضحت نتائج الد ارسة حدوث ارتفاع ممحوظ في معدل المضادة نوع IgM في مجموعة الخمجين االطفال )27.7±262.9( مقارنة بالمعدل في مجموعة السيطرة )42.0±222.2(,إال إن نتائج التحميل االحصائي اظيرت عدم وجود فروق معنوية بين مجموعة الخمجين ومجموعة السيطرة جدول) 2 (. جدول )1( يبين تاثير االصابه ب.G lamblia عمى معدل تركيز االجسام المضادة نوع IgM IgA IgG مقاسا نوع االجسام المضادة المضادة نوع IgG المضادة نوع IgA المضادة نوع IgM ب ممغم/ ديسميتر مجموعة الخمجين 92.5 ± مجموعة السيطرة ± ± ± ± ± وجد من نتائج الد ارسة إن ىنالك زيادة ممحوظة في تركيز المكونيين الثالث وال اربع لممتمم في مجموعة االطفال الخمجين إذ بم معدل )22.5±22.0( )24.7±254.5( و C 4 C 3 مقارنة بمعدالتيا في مجموعة السيطرة )99.0 ± 25.0(,) ( ± عمى التوالي. ولوحظت فروق معنوية (0.05>P) بين كال المجموعتين جدول )4(. جدول )2( يبين تاثير االصابه ب.G lamblia في تركيز المكونيين الثالث وال اربع لممتمم C 4 C 3 مقاسا ب ممغم/ديسميتر. نوع المتمم تركيز المكون الثالث C 3 لممتمم تركيز المكون ال اربع المناقشة لممتمم مجموعة الخمجين 24.7±254.5 مجموعة السيطرة 25.0± ± ±22.0 C 4 اشارت د ارسة [40] الى ان االصابو ب.G lamblia و E. histolytica Specific immune respons تؤدي الى حدوث استجابة مناعية نوعية متمثمة بانتاج االجسام المضادة وعند د ارسة مستوى االجسام المضادة نوع IgM, IgA, IgG في الخمجين ب G. lamblia اظيرت النتائج وجود ارتفاع معنوي )0.05> P( في مستوى IgA,IgG وغير معنوي في مستوى IgM مقارنة بمستوياتيا في مجموعة السيطرة, وىذه النتائج تتفق مع ماذكره [20] [29] و الذين اشاروا الى ارتفاع مستوى االجسام المضادة نوع IgM, IgA, IgG [42] في مصل المصابين ومع ما سجمتو من ارتفاع مستوى االجسام المضادة لالنواع المذكورة في المصل اثناء مدة االصابو لكن نتائج ىذه الد ارسة اختمفت مع الباحثين اعاله في مستوى IgM الذي ارتفع بشكل غير معنوي, وربما يرجع ذلك الى ان المرضى قد تجاوزوا الم ارحل المبكرة من االصابو, وجاءت مطابقة مع الذي قام [44] بد ارسة تجريبية في الحمالن لوحظ خالليا زيادة في مستوى االجسام المضادة نوع معنوية في مستوى.IgM IgA, IgG في حين لم يسجل فروق

4 [6] Ey, P. L.; Bruserer, T.; Wehrll, C.; Kohler P. "Comparison of Genetic Groups Determined by Molecular and Immunological Analysis of Giardia Isolated from Animals and Humans in Switzerland and Australia" Parasitol. Res., 28:52-60, [7] Hill, D. R.; Theodore E. N. "Intestinal Flagellate and Ciliate Infections" In: Tropical Infections Disease, Principle, Pathogens and Practice, by: Generrant, Richard I.; David H. Walker and Peter F. Weller, 1(38): , [8] Gardner, T. B.; David R. Hill "Treatment of Giardiasis" Clin. Microbiol. Rev., 14(1): , [9] Farthing, M. J. G. "Giardia lamblia In: Infections of the Gastrointestinal Tract" (ed.). Blaser, M. J.; P. P. Smith; J. I. Ravdin; H. B. Greenberg and R. L. Guerrant, Raven Press. Ltd., New York. Pp: , [10] Faubert, G. "Immune Response to Giardia duodenalis" Clin. Microbiol. Rev., 13(1):35-54, [11] Furness, Bruce W.; Michael J. Beach; Jacquelin M. Roberts "Giardiasis Surveillance-United States, " Mor. Mortal. Wkly. Rep. Edc. Surveill. Summ., 49(7):1-13,2000. [12] Oberhuber, G.; Stolte M. "Histologic Detection of Trophozoites of Giardia lamblia in the Terminal Ileum" J. Gastroentrol., 30: , [13] Aggarwal, A.; Nash T. E. "Comparison of Two Antigenically Distinct Giardia lamblia Isolates in Gerbils" Am. J. Trop. Med. Hyg. 36: , [14] Marquardt, W. C.; Richard S. D. ; Robert B. G." Parasitology and Vector Biology" 2nd Ed., Academic Press., U.S.A, Pp:89-96, [15] Nash, T. E.; Gillin F. D. ; Smith P. D. "Excretory Secretory Products of Giardia lamblia" J. Immunol., 131: , [16] Ebert, E. C. "Giardia Induces Proliferation and Interferon- Production by Intestinal Lymphocytes" Gut., 44: , اريج عطية حسين نظام المتمم يتكون من اكثر من ثالثين بروتينا بعضيا ح ار, واالخر مرتبط باالغشية ليا القابمية عمى التفاعل مع بعضيا ومع منشطاتيا, ويكون الكبد المصدر الرئيس لتصنيع بروتينات المتمم [42]. وىو يمثل احد اكبر االجيزة الدفاعية في الجسم إذ يمعب دو ار ميما في السيطرة عمى التفاعالت االلتيابية, والتخمص من المعقدات المناعية, فضال عن قيامو بتنشيط الخاليا النتاج االضداد والدفاع ضد الكائنات الدقيقة اظيرت نتائج د ارسة مستويات بروتينات المتمم.[28] ( 3 )C 4,C وجود ارتفاع معنوي في مستوى تركيز C 4,C 3 في مصول المرضى الخمجين ب.G lamblia مقارنو مع مجموعة السيطرة وىذه النتائج تتفق مع ما توصمت اليو [42], وربما يعود ذلك الى الدور الذي يمعبو C 3 في المسمك البديل لممتمم في الشفاء من الطفيمي ولكن ىذا يختمف مع [20] الذي اكد عمى ان مصل االنسان لو تاثير قاتل لمطفيمي.G lamblia ويظير ىذا التاثير معتمدا عمى المسمك التقميدي لممتممpathway.Classical Complement إن مصل االنسان لو تأثير قاتل لطفيمي.G, lamblia ويظير ىذا التاثير معتمدا عمى المسمك التقميدي لممتمم, الحظ كما [47] إن نظام المتمم يساىم في تحمل طور الناشطة من خالل تداخل المسمك التقميدي لممتمم مع االجسام المضادة نوع.IgM References [1] Haque, R.; Christopher D. H.; Molly H.; Eric H. and William A. P. "Amebiasis" Med. J., 348(16): , [2] Suwatano, O. "Acute Diarrhea in Under Five-year-old Children Admitted to King Mngkut Prachomklao Hospital" Petchaburi Province, J. Med. Assoc. Thai., 80(1): 26-33, [3] W.H.O. Prevention and Control of Intestinal Parasitic Infections: Technical Report Series, No. 749, Pp.8, [4] Cook, G. C."Entamoeba histolytica and Giardia lamblia Infections Current Diagnostic" Strategies, J. Parasitol., 2(2): , [5] Markell, E. K.; John D. T.; Krotoski W. A., Markell and Voge's "Medical Parasitology" 8 th ed., W. B. Saunders Co., Philadelphia, Pp:501, 1999.

5 Abstract This study designed to estimate levels of IgG, IgA, IgM, and complement components in sera of children infected with Giardia lamblia. Thirty two fecal samples were collected from children infected with Giardia lamblia admitted to Al-Kadhmiya Teaching Hospital at Al-Karkh district and Al-Qadisia General Hospital at Al-Rosafa during the period 24 th / April /2004 to 24 th / September/ They diagnosed by direct microscopic examination and Lugol s-iodine staining. Thirty two blood samples of the same age group were collected from children infected with Giardia lamblia and from 20 healthy of the same age group. Results revealed that the levels of IgG and IgA were significantly increased during the infection when compared with healthy control group. A moderate increase but not significant recorded in the level of IgM in infected children when compared with control group. Also there was a significant increase in the level of C 3, C 4 observed when compared with control group. مجمة جامعة النهرين المجمد 16 العدد) 1 ( آذار 2013 ص 1-5 [17] Cruse, J. M.; Lewis R. E. "Atlas of Immunology" CRC Press, N. Y., U.S.A, Pp: , [18] Roitt, I.; Brostoff J.; Male D. "Immunology" 6th Ed., Mosby, Spain, Pp: , [19]Wolfe, M. S."Giardiasis" Clin. Microbiol., 5(1):93-100, [20] Stewart, J. "Parasitic Infections Pathogenesis and Immunity" In: Medical Microbiology, by: Greenwood, David; Richard C. B. Slack and John F. Peutherer, 17th Ed., Printedin China by RDC Group Limited, Pp: , [21] AL-Anbaki, K. A. "Study of immunological aspect during infection with Giardia lamblia " M.SC., Thesis, Coll. Sci. Al-Mustansiriyaa Univ [22] Yanke, S. J.; Geri H.; McAllister T. A.; Orck D. W.; Olesn M. E. "Serum Immune Response to Giardia duodenalis in Experimentally Infected Lambs" Vet. Parasitol., 75(1):9-19, [23] Benjamini, E.; Coica R.; Sunshine G. "Immunology. A Short Course" 4th Ed., Wiley-Liss, Inc., U. S. A. Pp: 70-80, [24] Frank, M. M. "Complement and Kinin In: Medical Immunology" by: Stities, D. P.; A. F. Terr and T. Go. Parslow T. G., 9th Ed., Prentice-Hall International Inc., U.S.A., Pp: , [25] Cunion, Kenji M.; Eric wagner; Michael M. Frank "Complement and Kinin In: Medical Immunology" by: Parslow, Tristram G.; Daniel P. Stites; Abba I-Terr and John B. Imboden, 10th Ed., Prentice. Hall International Inc., U.S.A., pp: , [26] Ad hiahm, A. H. "Immunogentic Studies in Selected Human Disease". University of New Castle Upon Tynneg, U. K., [27] Deguchi, M.; Gillin F. D.; Gigt I. "Mechanism of Killing of Giardia lamblia Trophozoite by Complement" J. Clin. Investig., 79 : ,